技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于綿羊分子標(biāo)記篩選與應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及NGF基因作為綿羊產(chǎn)羔性狀的分子標(biāo)記及其應(yīng)用。本發(fā)明的分子標(biāo)記克隆自NGF基因。

背景技術(shù)

種羊的選育是現(xiàn)代化羊場育種和種羊生產(chǎn)工作中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在影響家畜生產(chǎn)效益的幾大科技因素中，遺傳育種與繁殖的科技貢獻(xiàn)率占50％，因此提高羊群繁殖力有助于提高生產(chǎn)效益。第一，在舍飼養(yǎng)羊的成本中，母羊飼養(yǎng)成本占飼養(yǎng)總成本的60％以上，提高母羊的繁殖性能能顯著提高生產(chǎn)者經(jīng)濟(jì)效益。第二，通過種羊的選育，增加種羊淘汰率，降低飼養(yǎng)成本。第三，在規(guī)模化、集約化養(yǎng)殖場由于遺傳因素、飼養(yǎng)管理水平等因素引起母羊?qū)遗洳辉?、產(chǎn)弱羔、死羔等繁殖問題凸顯，導(dǎo)致羊群年繁殖效率降低。傳統(tǒng)育種方法中，對家畜性狀選擇的方法多依賴于家畜的表型，這種方法在大家畜選育中需要豐富的經(jīng)驗和長達(dá)幾十年時間。此外，對于一些特殊性狀，如母羊的產(chǎn)羔數(shù)性狀，該性狀屬于微效多基因控制的低遺傳力的數(shù)量性狀，且受到不同環(huán)境和飼養(yǎng)條件的影響，常規(guī)育種方法遺傳改良進(jìn)展緩慢。隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展和完善，利用與綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀緊密連鎖的分子遺傳標(biāo)記，對產(chǎn)羔數(shù)性狀進(jìn)行跟蹤性選擇，減少育種過程中選擇的盲目性，進(jìn)行早期選育，極大提高育種效率。

神經(jīng)生長因子(Neuron Growth Factor，NGF)是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族中的重要成員之一。NGF與其高親和力受體TrKA結(jié)合，誘導(dǎo)TrKA酪氨酸殘基磷酸化，通過激活磷脂酶Cγ(PLCγ)、磷脂酶肌醇激酶(PI3K)以及銜接蛋白(Shc)信號通路，調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)中膽堿能神經(jīng)元的分化和發(fā)育(Counts S等，2005，請在說明書末尾注明完整的參考文獻(xiàn)信息)。近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，NGF在大鼠、小鼠、金倉鼠、牛、綿羊、山羊、豬、猴子等物種卵巢中表達(dá)(Ren LQ等，2005)。NGF及其受體在卵泡生長發(fā)育、排卵、卵巢激素的合成、配子運輸、精子獲能、受精以及早期的胚胎等方面都有重要的生物學(xué)功能(瞿長偉等，2014)，NGF可以促進(jìn)原始卵泡的組裝和腔前卵泡的形成(Dissen GA等，2001)，通過調(diào)控類固醇激素合成、PGF合成以及卵泡膜細(xì)胞增殖參與排卵過程(Dissen GA等，2011)。

通過以上分析，我們可以得出NGF基因參與動物繁殖調(diào)控過程，尤其是卵子發(fā)生和卵泡發(fā)育。尋找NGF基因中變異位點，通過與性狀間的關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)基因與性狀之間的關(guān)系是研究基因功能的一個重要手段，也是進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇的基礎(chǔ)。為此，本發(fā)明開展了綿羊NGF基因序列克隆和SNP篩查、檢測及與產(chǎn)羔數(shù)性狀關(guān)聯(lián)分析。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種提高綿羊產(chǎn)羔數(shù)的分子輔助選育標(biāo)記，通過尋找NGF基因的SNP位點，篩選得到一種一種與綿羊產(chǎn)羔性狀相關(guān)的分子標(biāo)記，以克服常規(guī)育種方法周期長、選擇準(zhǔn)確性低、無法進(jìn)行早期選育等技術(shù)缺陷，通過PCR-RFLP技術(shù)對候選個體的NGF基因進(jìn)行基因型分析，為綿羊產(chǎn)羔數(shù)性狀檢測提供一種輔助選擇的分子標(biāo)記。

技術(shù)負(fù)責(zé)人： 李萬宏 草地農(nóng)業(yè)科技學(xué)院