本發(fā)明選擇結(jié)核桿菌生長(zhǎng)期和休眠期主要的保護(hù)性抗原Mtb10.4和Hsp16.3，構(gòu)建融合蛋白Mtb10.4-Hsp16.3（MH）。在大腸桿菌中表達(dá)純化該蛋白，將該蛋白和佐劑混合構(gòu)建亞單位疫苗，分別于BCG初免后12、14周加強(qiáng)免疫C57BL/6小鼠兩次，最后一次免疫6周后檢測(cè)細(xì)胞免疫反應(yīng)，最后一次免疫后10周進(jìn)行結(jié)核菌毒株H37Rv攻擊。結(jié)果：該融合蛋白能在大腸桿菌中穩(wěn)定大量表達(dá)，經(jīng)離子交換層析、凝膠過(guò)濾層析和疏水層析三步純化得到純度較高的蛋白；構(gòu)建的亞單位疫苗免疫動(dòng)物可產(chǎn)生針對(duì)結(jié)核桿菌特定抗原（Mtb10.4和Hsp16.3）的特異性細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答，具有較強(qiáng)的免疫原性；毒株攻擊后，小鼠肺臟結(jié)核菌數(shù)量明顯少于PBS組和BCG組。結(jié)論：本發(fā)明成功構(gòu)建、表達(dá)和純化不帶任何標(biāo)簽的融合蛋白MH,此蛋白可誘導(dǎo)較強(qiáng)的細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答并具有一定的動(dòng)物保護(hù)效應(yīng)，有望成為臨床結(jié)核病預(yù)防和治療的候選疫苗。

技術(shù)負(fù)責(zé)人：祝秉東  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院